超微量核酸蛋白測定儀的比色法
那么下面上海金鵬分析儀器有限公司為大家簡單介紹一下關(guān)于超微量核酸蛋白測定儀的比色法：
BCA、Lowry、Bradford都是通過比色來檢測非純蛋白的濃度的方法。比色法檢測蛋白濃度時必須構(gòu)建一個標準曲線，因此將這三種測量蛋白的方法集合在比色法中。
BCA是一種通過比色來檢測非純蛋白的濃度的方法，它通常用于稀釋的蛋白濃度檢測以及那些含有在紫外區(qū)域有光吸收的雜質(zhì)的蛋白的濃度檢測。BCA法是檢測Cu+1離子的方法，在堿性環(huán)境下，Cu＋2離子會被蛋白還原為Cu+1離子。兩個聯(lián)喹啉二羧酸BCA分子和一個 Cu+1離子形成紫色的螯合物這樣在有蛋白存在情況下，Cu-BCA形成的螯合物在562nm出有光吸收，以750nm光系數(shù)為標準化。
商業(yè)化的BCA試劑盒有兩種蛋白檢測范圍：
常規(guī)檢測使用試劑/蛋白樣品的體積比為20:1，這個試劑盒檢測范圍從0.20mg/到8.0mg/ml（BSA）。當(dāng)使用基座檢測時，推薦使用4ul 樣品和80ulBCA試劑。
微量檢測使用1：1試劑/樣品，可以檢測蛋白濃度范圍從0.01mg/ml至0.20mg/m要準備足夠的樣品來做基座檢測，建議使用10ul樣品和10ulBCA試劑（使用P管）。
按照試劑盒廠家建議的操作來構(gòu)建標準曲線和樣品準備。確保在所有檢測過程使用相同的時間和溫度。
    注意：如果試驗溫度高于60度，最好使用2倍的試驗體積，避免揮發(fā)導(dǎo)致樣品減少，從而影響測試結(jié)果。
Lowry法蛋白定量是一個應(yīng)用非常廣泛的蛋白定量方法。Lowry法是蛋白與硫酸銅在堿性環(huán)境下反應(yīng)形成銅-蛋白復(fù)合物。Folin－Ciocalteu試劑可以有效的還原銅復(fù)合物，產(chǎn)生與蛋白量成比例的藍色產(chǎn)物，可以在650nm檢測，405nm處校準。試驗中使用的試劑可以從多個廠家購買。
要準確準備標準品，推薦使用20ul的蛋白樣品和100ul的Lowry試劑來做反應(yīng)。在本儀器上可以檢測的樣品濃度范圍是從0.20mg/ml到4mg/ml。按照試劑盒生產(chǎn)廠家的說明來準備標準品和樣品。在所有操作過程中要保持每個樣品處理時間和環(huán)境溫度一致。由于本儀器基座檢測的濃度范圍比常規(guī)檢測更大，在構(gòu)建標準曲線時需要構(gòu)建比廠家建議更寬的標準曲線范圍。檢測需要的樣品量推薦使用2ul。
Bradford是常用的蛋白定量的方法。它通常用于濃度比較低的蛋白的濃度檢測。Bradford法是根據(jù)蛋白能夠使考馬斯亮藍嘗試吸收位移來檢測蛋白濃度的，一般在595nm處檢測吸光度。蛋白-染料復(fù)合物在595nm處檢測并在750nm處做標準化。可以從多個廠家購買相應(yīng)的試劑盒。
商業(yè)化的 Bradford 試劑盒有兩種蛋白檢測范圍：
常規(guī)檢測使用試劑/蛋白樣品的體積比為50:1，這個試劑盒檢測范圍從0.10mg/ml到8.0mg/ml（BSA）。線形范圍在0.01-1mg/ml。當(dāng)使用基座檢測時，推薦使用4ul 樣品和200ul Bradford 試劑。
微量檢測使用1：1 試劑/樣品，可以檢測蛋白濃度范圍從15ug/ml 至125ug/ml。要準備足夠的樣品來做基座檢測，建議使用10ul 樣品和10ulBCA 試劑（使用PCR管）。按照試劑盒廠家建議的操作來構(gòu)建標準曲線和樣品準備。確保在所有檢測過程中使用相同的時間和溫度。
    注意：如果試驗溫度高于60度，最好使用2倍的試驗體積，避免揮發(fā)導(dǎo)致樣品減少，從而影響測試結(jié)果。    
在Bradford試劑盒中同樣包括用于構(gòu)建標準曲線的標準品。由于本儀器能夠檢測比常規(guī)比色皿檢測更高的濃度，用戶需要使用比廠家推薦的標準品更高的濃度。
5.2 比色法檢測
注意：比色法檢測進行樣品檢測前，需要建立標準曲線！
超微量核酸蛋白測定儀維護保養(yǎng)秘訣
超微量核酸蛋白測定儀是精密光學(xué)儀器，出廠前經(jīng)過精細的裝配和調(diào)試，如果能對儀器進行恰當(dāng)?shù)木S護和保養(yǎng)，不僅能保證儀器的可靠性和穩(wěn)定性，也可以延長儀器使用壽命。
超微量核酸蛋白測定儀常用于定量溶于緩沖液的寡核苷酸，單鏈、雙鏈DNA，以及RNA。核酸的最高吸收峰的吸收波長260 nm。每種核酸的分子構(gòu)成不一，因此其換算系數(shù)不同。定量不同類型的核酸，事先要選擇對應(yīng)的系數(shù)。如：1OD 的吸光值分別相當(dāng)于50μg/ml的dsDNA，37μg/ml的ssDNA，40μg/ml的RNA，30μg/ml的Olig。測試后的吸光值經(jīng)過上述系數(shù)的換算，從而得出相應(yīng)的樣品濃度。
 
超微量核酸蛋白測定儀的工作原理是利用分光光度法對物質(zhì)進行定量定性分析的儀器，常用于核酸，蛋白定量以及細菌生長濃度的定量。無論在物理學(xué)、化學(xué)、生物學(xué)、醫(yī)學(xué)、材料學(xué)、環(huán)境科學(xué)等科學(xué)研究領(lǐng)域 ,還是在化工、醫(yī)藥、環(huán)境檢測、冶金等現(xiàn)代生產(chǎn)與管理部門 ,紫外可見核酸蛋白測定儀督有廣泛而重要的應(yīng)用。
 
超微量核酸蛋白測定儀是精密光學(xué)儀器，正確安裝、使用和保養(yǎng)對保持儀器良好的性能和保證測試的準確度有重要作用。下面分享一些超微量核酸蛋白測定儀不可不知的保養(yǎng)常識。
(1)儀器工作環(huán)境的要求
超微量核酸蛋白測定儀對工作環(huán)境的要求如下。
①儀器應(yīng)安放在干燥的房間內(nèi)，使用溫度為5～35℃．相對濕度不超過85％。
②儀器應(yīng)放置在堅固平穩(wěn)的工作臺上，且避免強烈的振動或持續(xù)的振動。
③室內(nèi)照明不宜太強，且應(yīng)避免直射日光的照射。
④電扇不宜直接向儀器吹風(fēng)，以防止光源燈因發(fā)光不穩(wěn)定而影響儀器的正常使用。
⑤盡量遠離高強度的磁場、電場及發(fā)生高頻波的電器設(shè)備。
⑥供給儀器的電源電壓為AC 220V±22V，頻率為50Hz±1Hz，并必須裝有良好的接地線。推薦使用功率為1000w以上的電子交流穩(wěn)壓器或交流恒壓穩(wěn)壓器，以加強儀器的抗干擾性能。
⑦避免在有硫化氫等腐蝕性氣體的場所使用。
 
(2)儀器的日常維護和保養(yǎng)
①光源。光源的壽命有限，為了延長光源使用壽命，在不使用儀器時不要開光源燈，應(yīng)盡量減少開關(guān)次數(shù)。在短時問的工作間隔內(nèi)可以不關(guān)燈。剛關(guān)閉的光源燈不能立即重新開啟。
儀器連續(xù)使用時間不應(yīng)超過3h。若需長時間使用，最好間歇30min。如果光源燈亮度明顯減弱或不穩(wěn)定，應(yīng)及時更換新燈。更換后要調(diào)節(jié)好燈絲位置，不要用手直接接觸窗口或燈泡，避免油污沾附。若不小心接觸過，要用無水乙醇擦拭。
②單色器。單色器是儀器的核心部分，裝在密封盒內(nèi)，不能拆開。選擇波長應(yīng)平衡地轉(zhuǎn)動，不可用力過猛。為防止色散元件受潮生霉，必須定期更換單色器盒干燥劑(硅膠)。若發(fā)現(xiàn)干燥劑變色，應(yīng)立即更換。
③吸收池。必須正確使用吸收池，應(yīng)特別注意保護吸收池的兩個光學(xué)面。
④檢測器。光電轉(zhuǎn)換元件不能長時間曝光，且應(yīng)避免強光照射或受潮積塵。
⑤當(dāng)儀器停止工作時，必須切斷電源。
⑥為了避免儀器積灰和沾污，在停止工作時，應(yīng)蓋上防塵罩。
⑦儀器若暫時不用要定期通電，每次不少于20～30min，以保持整機呈干燥狀態(tài)，并且維持電子元器件的性能。
以上就是上海金鵬分析儀器有限公司為大家整理總結(jié)關(guān)于超微量核酸蛋白測定儀的比色法。
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