AKTA蛋白純化系統(tǒng)的一般操作：
1、開(kāi)機(jī)
按位于底部平臺(tái)前左側(cè)的ON/OFF 按鈕，打開(kāi)色譜系統(tǒng)，然后打開(kāi)電腦電源。待儀器自檢完畢（CU950上面的3個(gè)指示燈完全點(diǎn)亮并不閃爍）。雙擊桌面上UNICORN圖標(biāo)，進(jìn)入操作界面。UNICORN的操作界面分為四個(gè)窗口（Fig 3）
2、準(zhǔn)備工作溶液和樣品
所有的工作溶液和樣品需要經(jīng)過(guò)0.45μm的濾膜過(guò)濾，樣品也可高速離心后取上清備用。當(dāng)緩沖液中含有有機(jī)溶劑（如乙腈、甲醇），需在使用前用低頻超聲脫氣10min。
3、清洗及管道準(zhǔn)備
首先將A泵的進(jìn)液管道（A1）放入緩沖液或平衡液中，將B泵的進(jìn)液管道(B1)放入高鹽溶液中，在system control窗口點(diǎn)擊工具欄內(nèi)的manual，選擇 pump→pump wash explorer，選中A1,B1管道為ON， execute。泵清洗將自動(dòng)結(jié)束。(Fig 4)

                                                                    Fig 4、AKTA Explorer的泵清洗操作
4、安裝層析柱
在manual里選擇pump→flow rate，輸入一定的低流速（Fig 5），insert；選擇Alarm&mon→alarm pressure，設(shè)置high alarm（輸入填料或?qū)游鲋哪褪軌毫?，以較低者為設(shè)置值，具體可在填料說(shuō)明書(shū)或?qū)游鲋f(shuō)明書(shū)中查到），insert，execute（Fig 6） 。待InjectionValve的1號(hào)位管道流出水后接入柱子的柱頭，稍微擰緊后將柱下端的堵頭卸掉接入管道連上紫外流動(dòng)池。

                                                                      Fig 5、AKTA Explorer的流速設(shè)定操作


                                                                  Fig 6、AKTA Explorer的限壓設(shè)定操作
5、開(kāi)始純化：
1）在柱子平衡好之后（電導(dǎo)，pH的數(shù)值和變化趨勢(shì)穩(wěn)定）即開(kāi)始上樣了。此時(shí)應(yīng)將紫外調(diào)零（Fig 7），選擇Alarm&mon→autozero，exectue。

                                                                  Fig 7、AKTA Explorer的紫外調(diào)零操作
2）具體上樣方式：AKTA系統(tǒng)的上樣方式比較靈活，可以根據(jù)具體樣品的條件進(jìn)行上樣，包括用樣品環(huán)上樣、用系統(tǒng)泵上樣、用樣品泵上樣等，這里以用系統(tǒng)泵上樣為例簡(jiǎn)單介紹上樣過(guò)程。點(diǎn)擊pause，將A1放入樣品中，點(diǎn)擊countine，待樣品上完后，再將A1放入到平衡液中繼續(xù)清洗柱子。
3）洗脫：上樣后用緩沖液盡量將穿透峰洗回基線。在manual里選擇pump→gradient，
按照自己的工藝選擇targetB（100％）和length（10CV）（Fig 8）。

                                                                    Fig 8、AKTA Explorer的洗脫條件設(shè)定操作
4）設(shè)定收集：選擇Frac→fractionation_900,輸入每管收集體積，exectue（Fig 9）。結(jié)束固定體積收集選擇Frac→fractionation_stop_900，exectue（Fig 10）

                                                                   Fig 9、AKTA Explorer的組分收集設(shè)定操作


                                                                   Fig 10、AKTA Explorer的組分收集停止設(shè)定操作
5）清洗泵及卸下層析柱：
將A1和B1入口放入純水中，啟動(dòng)pump wash purifier功能沖洗A泵和B泵及整個(gè)管路。然后再將A1和B1入口放入20％乙醇中，同樣操作將乙醇沖滿整個(gè)管路保存。再給柱子一個(gè)慢流速，設(shè)置系統(tǒng)保護(hù)壓力，然后先拆柱子的下端，正在滴水的時(shí)候?qū)⒍骂^擰上，再拆柱子的上端，再擰上上端的堵頭。整個(gè)過(guò)程中應(yīng)防止氣泡進(jìn)入。
6）關(guān)閉電源：
從軟件控制系統(tǒng)的開(kāi)始一個(gè)窗口unicorn manager點(diǎn)擊退出，其他窗口不能單獨(dú)關(guān)閉。然后關(guān)閉AKTA主機(jī)電源，關(guān)閉電腦電源。

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